伏马毒素的危害

伏马毒素（Fumonisin，FB）是由镰刀菌属在一定的温度和湿度下产生的水溶性代谢产物，对食品污染的情况在世界范围内普遍存在，主要污染玉米及玉米制品。动物试验和流行病学资料已表明，伏马菌素主要损害肝肾功能，能引起马脑白质软化症和猪肺水肿等，并与我国和南非部分地区高发的食道癌有关，现已引起世界范围的广泛注意。
伏马毒素的检测国内外已建立了多种方法。伏马毒素的分析方法通常包括提取、纯化、分离和检测几个步骤。目前，大多数方法均采用免疫亲和柱（Pribolab）纯化样品，应用HPLC或GC结合不同的检测器进行。

伏马毒素（B1, B2,和B3)是由镰孢菌(霉)属念珠菌产生的真菌毒素。在世界范围内都发现了伏马毒素污染玉米的现象。研究表明伏马毒素可以诱发老鼠患肝癌，猪的肺水肿和马的脑脊髓白质病。在一些地区中玉米中伏马毒素含量很高，在这些地区（比如中国和非洲）人的食道癌具有高发性。

适用

PriboFast伏马毒素试剂盒原理是竞争酶联免疫反应，用于检测玉米中的伏马毒素。

原理

这个 Pribolab伏马素素检测试剂盒的原理是固相直接竞争酶联免疫反应。聚苯乙烯微孔板中包被伏马毒素的特异性抗体，这种抗体和伏马毒素的各个亚型都有很好的交叉反应。利用90%的甲醇从样品中提取伏马毒素，把提取的样品和HRP（辣根过氧化物酶）标记的伏马毒素混匀并加入对应的孔检测。酶标记毒素与标准品或样品中的伏马毒素竞争与包被在微孔底部的抗体结合。孵育一段时间后，倒出孔里的液体，清洗除去没有反应的物质后加入显色底物（TMB），在酶的作用下孔里将会出现蓝色。显色颜色的深浅与结合物的量成正比例的关系，与标准品或样品中伏马毒素的量成反比例关系。所以，标准品或样品中的伏马毒素浓度越高，显色的蓝色将会越浅。加入酸，终止反应，底物颜色由蓝色变为棕黄色。微孔板放进酶标仪里，在OD450nm读取吸光度值。样品的吸光度值与试剂盒中标准OD值相比较，相对应得出结果。

提取步骤中需要的材料

• 研磨器；
• 烧杯：125ml；
• 天平：量程为20g
• 量筒：100ml
• 甲醇：每个样品36ml 
• 蒸馏水：每个样品4ml
• 滤纸 ：用针孔过滤器代替；漏斗

测定步骤：

• 100μL或200μL 单道或多道移液器；计时器； 洗瓶；吸水纸；450nm 滤光片的酶标仪
• 警告和注意事项
• 使用前将所有的试剂拿到室温（19℃-27℃）。
• 试剂贮存在2℃到8℃，不要使用过期的产品。不要冰冻试剂盒。
• 没有用完的试剂不要回收到原试剂瓶中。操作过程中按照要求精确量取试剂体积。
• 整个操作过程要严格按照要求的时间和温度。
• 不要用口移取试剂或样品。
• 终止液里含有酸，不要与皮肤和眼睛接触。如果有接触，一定要用清水清洗。
• 所有的材料、试剂和仪器可能被样品或标准品中的伏马毒素污染，在操作过程中一定要戴手套。
• 使用完毕，处理好所有的材料、试剂和仪器。

样品提取步骤
注意：样品必须按照有关规定收集

• 配制90%的甲醇溶液（每个样品需要：4ml蒸馏水+36ml甲醇）
• 研磨代表性样品（使50%的样品可以通过一个20目的滤网）。
• 称量20g研磨过滤后的样品加入40ml 90%的甲醇溶液，样品稀释比为1:2(w/v)。
• 在密封的容器里混合，至少震荡1分钟。
• 静置、过滤5-10ml 以上处理的液体，收集滤液。
• 以1：20的比例稀释滤液（取0.1ml样品提取液然后加入1.9ml的蒸馏水或无离子水）
• 样品最终稀释倍数为1：40，待测。

样品测定步骤
注意：在操作时推荐使用排枪，同时每个样品都做2个平行。

• 使用前将试剂拿到室温。用1L水溶解PBS-Tween 袋。
• 取出混合板放于微孔支架上用于标准和样品的测试，取相同数量的微孔（包被有抗体）置于另一个微孔支架上。
• 在每个混合板微孔中加入先加入100μl 结合物溶液A(绿色)，然后再加入100ul结合物溶液B（无色）。
• 在加有结合物的混合版的孔中加入100 μl 标准或样品，用枪头混合3次，
• 转移100ul预混板微孔中的液体到对应的包被有抗体的微孔中，室温孵育10分钟，最好使用多道移液器。混合空中的液体足够做两个平行。
• 将孔里的液体倒入合适的容器中，用蒸馏水或无离子水洗板，然后迅速弃掉洗液到合适的容器中，重复洗3次。在一层厚的吸水纸上拍板，去掉残留的洗液。
• 在吸水纸上拍打，尽可能地将水拍干。
• 每孔加入100 μl底物溶剂，室温孵育10min。
• 每孔加入 100 μl 终止液。
• 对比标准和样品的颜色，或在OD450 nm读数。