高效液相色谱测定人工添加剂

       安赛蜜中文名称为乙酰磺胺酸钾，为人工合成甜味剂， 经常食用合成甜味剂超标的食品会对人体的肝脏和神经系统造成危害， 特别是对老人、孕妇、小孩危害更为严重。如果短时间内大量食用，会引起血小板减少导致急性大出血。因此需按业内标准严格控制，本文推出了一种高效液相色谱测定食品中的安赛蜜的方法。

       1、原理

       试样中安赛蜜经高效液相反向C18柱分离后,以保留时间定性,外标法定量。

       2、试剂

       除非另有说明, 所有试剂均为分析纯, 水为GB/T6628 规定的一级水。

       (1) 0102mol 乙酸胺溶液:称取1154g 乙酸铵加水溶解定容至1000ml ,经滤膜(0145um) 过滤。

       (2) 甲醇:色谱纯。

       (3) 10 %亚铁氰化钾溶液。

       (4) 20 %乙酸锌溶液。

       (5) 安赛蜜标准储备液,精称安赛蜜0.1000g , (基准试剂或者标准物质) ,用纯水溶解。移入100ml 容量瓶中,加水定容至刻度,即含安赛蜜1mg/ ml 。

       (6) 安赛蜜使用液, 准确移取标准储备液10ml 于100ml 容量品种。加水至刻度,即为0.1mg/ ml 。然后分别移取此液2ml 4ml 6ml 8ml 10ml 于50ml 容量瓶中即得含安赛蜜4ug/ ml 8ug/ ml 12ug/ ml16ug/ ml 20ug/ ml 的标准液系列。

       3、仪器

       (1) 高效液相色谱仪(带紫外检测器) 。

       (2) 分析天平: 010001g 和0101g。

       (3) 超声清洗仪(溶剂脱气用) 。

       (4) 离心机转速不低于4000r/ min。

       (5) 蜗旋混匀器

       4、分析步骤

       (1) 汽水、可乐型饮料:将试样温热,搅拌除去二氧化碳或超声脱气。吸取5ml 试液至50ml 容量瓶中,加水约20ml 蜗旋混匀调PH 至中性, 定容至刻度, 摇匀, 过0.45um 的滤膜,待HPLC 分析用。

       (2) 果汁果茶类:吸取5ml 试液至50ml 容量瓶中,加水约20ml 蜗旋混匀调PH 至中性,定容至刻度,离心10分钟(4000r/ min) ,取上清液过0.45um 的滤膜,待HPLC分析用。

       (3) 植物蛋白饮料、乳饮料、酱油、果酱、冷饮:称取(2～5) g 试样于50ml 容量瓶中加入10 %亚铁氰化钾、20 %乙酸锌溶液各(1～3) ml (视蛋白含量多少) ,调PH 值至中性,用水定容至刻度,摇匀,静置沉淀后用中速定性滤纸过滤,滤液再用0.45um 滤膜过滤,待HPLC 分析用。

       (4) 面包、糕点、糖果、果冻、炒制坚果等固体类:称取粉碎试样(2～5) g 于50ml 容量瓶中加入10 %亚铁氰化钾、20 %乙酸锌溶液各(1～3) ml (视蛋白含量多少) ,调PH 值至中性,用水定容至刻度,摇匀,静置沉淀后用中速定性滤纸过滤,滤液再用0.45um滤膜过滤待HPLC分析用。

       5、测定

       (1) 高效液相色谱参考条件

       色谱柱: YWG—C18 416mm ×150mm 粒径5um

       流动相:甲醇:乙酸铵溶液(0102mo1/ 1) (5 :95)

       流速:1m1/ min

       进样量:10ul

       检测器:紫外检测器,230nm

       (2) 标准曲线: 分别进样含安赛蜜、4ug/ ml 8ug/ ml 12ug/ ml 16ug/ ml 20ug/ ml 标准溶液各10ul ,进行HPLC 分析,然后以峰面积为纵坐标,以安赛蜜的含量为横坐标,绘制标准曲线。

       (3) 试样测定: 吸取处理后的试样溶液10ul 进行HPLC 分析,测定其峰面积,从标准曲线查得测定液中安赛蜜的含量。

       6、结果计算

       试样中安赛蜜的含量按下式计算;

       X =C ×V ×1000/M ×1000

       式中:

       X —试样中安赛蜜的含量,单位为毫克每千克或毫克每升(mg/ kg 或mg/ L) ;

       C —由标准曲线上查得进样液中安赛蜜的量,单位为微克每毫升(ug/ ml) ;

       V —试样稀释液总体积,单位为毫升(ml) ;

       M —试样质量,单位为克或毫升(g 或ml) 。

       7、加标回收率

       空白果汁饮料样品加标回收率结果见表1 。加标回收安赛蜜回收率在9318 % ～10118 % ,平均回收率为97.75 %。实验证明用此方法测定食品中的安赛蜜,操作简便,分析结果准确、工作效率高,此方法切实可行。

附：汶颢商城，高效液相色谱仪——http://www.sys17.cn/goods.php?id=405