PMMA芯片的基本特性

1.背景荧光

芯片材料的背景荧光是影响芯片检测限的重要因素，而聚合物材料成分复杂，所以在挑选加工芯片的聚合物材料时应首先考察其背景荧光特性．国内某科研组通过对Pyrex 玻璃，石英玻璃，钠钙玻璃，PDMS，COP以及PMMA等诸多芯片加工材料的测试，我们发现，PMMA具有与石英玻璃、Pyrex玻璃相当的低于其他材料的背景荧光，同时与PDMS相比具有更短的光漂白时间和更稳定的背景荧光波动．这些优良的特性表明，我们的芯片所采用的PMMA材料比传统的芯片材料更适于高性能荧光标记的DNA分型检测。同时，我们还发现，不同厂商生产的PMMA 材料的背景荧光特性存在差异，所以在选择PMMA芯片加工之前需要仔细选取低背景荧光的材料。

2.检测限

国内某科研组使用40 pmol/L Cy5-dCTP和200pmol/L Cy3-dCTP 的混合水溶液测定Cy5和JOE通道的检测限，得到Cy5-dCTP 和 Cy3-dCTP的信噪比分别为30和21。若以信噪比大于3作为有效信号的判断标准，则Cy5-dCTP和Cy3-dCTP的实际检测限可分别低至 4 pmol/L 和 30 pmol/L。使用同一检测系统在 PDMS 和石英片贴合芯片上分析相同的 40 pmol/L Cy5-dCTP 时信噪比为 7，可以看出 PMMA 材料制作的芯片具有更高的检测限。

3.重现性

国内某科研组分别计算溶于水和0.5伊TBE缓冲液的 Cy5-dCTP 和 Cy3-dCTP 连续进样后迁移时间和峰高的标准偏差，用以表征PMMA芯片的重现性。溶于水的样品具有明显的场放大效应，峰高随进样次数的增加明显降低。而溶于缓冲液的样品表现出更 好的峰高重现性。当将Cy3通道的Cy3-dCTP 信号作为内标归一化Cy5通道的Cy5-dCTP 信号后，溶于水和缓冲液的样品均获得了良好的峰高和迁移时间重现性。此结果表明在PMMA 芯片上可以通过不同荧光标记的等位基因分型标准物，归一化实际样品并得到精确的基因分型结果。

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